ⅠNazido ukleikoainaurkezpena
Azido nukleikoa azido desoxirribonukleiko (DNA) eta azido erribonukleiko (RNA) banatzen da, horien artean RNA RNA erribosomiko (rRNA), ARN mezularia (mRNA) eta RNA transferitzeko (tRNA) bere funtzio ezberdinen arabera banatzen da.DNA batez ere nukleoan, mitokondrioan eta kloroformoan kontzentratzen da, eta RNA, berriz, zitoplasman banatzen da nagusiki.Geneen adierazpenaren oinarri material gisa, azido nukleikoen erauzketa oso garrantzitsua da biologia molekularreko ikerketan eta diagnostiko molekular klinikoan.Azido nukleikoen erauzketaren kontzentrazio eta garbitasunak zuzenean eragingo dute ondorengo PCR, sekuentziazioa, bektorearen eraikuntza, entzimaren digestioa eta beste esperimentu batzuetan.
Ⅱ Azido nukleikoak erauzteko eta arazteko metodoa
① Fenol/kloroformoa erauzteko metodoa
Fenol/kloroformoaren erauzketa DNA erauzteko metodo klasiko bat da, eta batez ere bi disolbatzaile organiko ezberdin erabiltzen ditu laginak tratatzeko, DNAn oinarritutako azido nukleikoa ur fasean, lipidoak fase organikoan eta bi faseen arteko proteinak disolbatuz.Metodo honek kostu baxua, garbitasun handia eta efektu ona ditu abantailak.Desabantailak funtzionamendu konplikatua eta denbora luzea dira.
② Trizol metodoa
Trizol metodoa RNA erauzteko metodo klasikoa da.Trizol metodoa kloroformoarekin zentrifugazioaren ondoren fase urtsuan eta fase organikoan banatzen da, zeinetan RNA fase urtsuan disolbatzen den, fase urtsua EP hodi berri batera transferitzen da, isopropanola gehitu ondoren prezipitazioa lortzen da eta, ondoren, etanola arazteko.Metodo hau egokia da animalia-ehunetatik, zeluletatik eta bakterioetatik RNA ateratzeko.
③ Zutabe zentrifugoen arazketa metodoa
Zentrifugatzaileen zutabearen arazketa metodoak DNA xurga dezake zehazki siliziozko matrizearen xurgapen material berezien bidez, RNA eta proteina leunki igaro daitezkeen bitartean, eta gero gatz altua PH baxua erabili azido nukleikoa konbinatzeko, gatz baxua PH balio handiko eluzioa azido nukleikoa bereizteko eta arazteko.Abantailak arazketa-kontzentrazio handia, egonkortasun handia, disolbatzaile organikorik behar ez eta kostu baxua dira.Desabantaila da urratsez urrats zentrifugatu behar dela, eragiketa urrats gehiago.
④ Ale magnetikoen metodoa
Ale magnetikoen metodoa zelula-ehunaren lagina lisatuaren bidez zatitzea da, laginaren azido nukleikoa askatzea eta, ondoren, azido nukleikoaren molekulak ale magnetikoaren gainazalean xurgatzen dira, proteinak eta azukreak bezalako ezpurutasunak geratzen diren bitartean. likidoa.Zelula-ehunen zatiketaren urratsen bidez, azido nukleikoarekin lotzeko ale magnetikoak, azido nukleikoen garbiketa, azido nukleikoen eluzioa, etab., azkenean azido nukleiko purua lortzen da.Abantailak funtzionamendu sinplea eta denbora laburrean erabiltzea dira, urratseko zentrifugazio beharrik gabe.Baldintza tekniko baxuak ditu eta funtzionamendu automatikoa eta masiboa egin dezake.Ale magnetikoaren eta azido nukleikoaren konbinazio espezifikoak ateratako azido nukleikoa kontzentrazio eta garbitasun handikoa da.Desabantaila da gaur egungo merkatuaren prezioa nahiko garestia dela.
⑤ Beste metodo batzuk
Goiko lau metodoez gain, irakiten cracking, gatz kontzentratuaren metodoa, detergente anionikoaren metodoa, ultrasoinuen metodoa eta metodo entzimatikoa, etab.
Ⅲ Azido nukleikoen erauzketa mota
Foregene-k munduko Direct PCR plataforma liderra du, zutabe bikoitzeko RNA isolatzeko plataforma (DNA soilik + RNA soilik).Produktu nagusiak DNA/RNA isolatzeko kitak, PCR eta Direct PCR erreaktiboak laborategi molekularreko erreaktiboen serieak dira.
① RNA erauzketa osoa
RNA guztizko erauzketa laginak odola, zelulak, animalia-ehunak, landareak, birusak eta abar barne hartzen ditu. Araztasun handia eta RNA osoaren kontzentrazio altua lor daiteke RNA osoaren erauzketa bidez, RT-PCR, txiparen analisian, in vitro itzulpenean, erabil daitekeena. klonazio molekularra, Dot Blot eta beste esperimentu batzuk.
Foregene erlazionatutaRNA isolatzeko kitak
Animalien RNA osoa isolatzeko kit--Apurtasun handiko eta kalitate handiko RNA osoa erauzi azkar eta eraginkortasunez animalia-ehun ezberdinetatik.
Zelula Guztira RNA isolatzeko kit--Oso araztua eta kalitate handiko RNA totala hainbat hazkuntzako zeluletatik lor daiteke 11 minututan.
Landare Guztira RNA isolatzeko kit--Azkar atera kalitate handiko RNA totala polisakarido eta polifenol eduki baxuko landare-laginetatik.
RNA birala isolatzeko kit--Bizkor isolatu eta araztu RNA birikoa, hala nola, plasma, serum, zelularik gabeko gorputz-fluidoak eta zelula-hazkuntzako gainnatzaileak bezalako laginetatik.
② DNA genomikoaren erauzketa
DNA genomikoaren erauzketa laginak lurzorua, gorotzak, odola, zelulak, animalia-ehunak, landareak, birusak, etab. ADN genomikoaren erauzketa entzimak digestioan, DNA liburutegien eraikuntzan, PCRan, antigorputzen prestaketan, Western blot hibridazioen analisian, gene txipetan, altuan erabil daiteke. -Erdibidearen sekuentziazioa eta bestelako esperimentuak.
Foregene erlazionatutaDNA Isolatzeko Kitak
Animalien ehunen DNA isolatzeko kit--ADN genomikoaren erauzketa eta arazketa azkarra iturri anitzetatik, hala nola animalien ehunetatik, zeluletatik, etab.
Blood DNA Midi Kit (1-5ml)--Azkar garbitu kalitate handiko DNA genomikoa odol antikoagulatutik (1-5 ml).
Buccal Swab/FTA Txartela DNA isolatzeko kit--Azkar garbitu kalitate handiko DNA genomikoa buccal swab/FTA Card laginetatik.
Landareen DNA isolatzeko kit--Azkar araztu eta lortu kalitate handiko DNA genomikoa landareen laginetatik (polisakaridoak eta polifenol landareen laginak barne)
③ Plasmidoen erauzketa
Plasmidoa zeluletako DNA molekula txiki zirkular moduko bat da, DNA birkonbinatzeko eramaile arrunta dena.Plasmidoak erauzteko metodoa RNA kentzea da, plasmidoa bakterioen DNA genomikotik bereiztea eta proteina eta beste ezpurutasun batzuk kentzea plasmido nahiko purua lortzeko.
Plasmid Mini Kit Orokorra--Araztu kalitate handiko plasmidoaren DNA eraldatutako bakterioetatik biologia molekularra ohiko esperimentuetarako, hala nola eraldaketa eta entzimaren digestioa.
④ Beste erauzketa mota batzuk, miRNA erauzketa, etab.
Animal miRNA isolatzeko kit--Azkar eta eraginkortasunez atera 20-200nt miRNA, siRNA, snRNAko RNA zati txikiak animalia-ehun eta zelula ezberdinetatik.
Ⅳ Azido nukleikoen erauzketa eta arazketa emaitzaren baldintzaks
① Azido nukleikoaren egitura primarioaren osotasuna bermatzeko.
② Proteinen, azukreen, lipidoen eta beste makromolekula batzuen interferentziak murriztea
③ Ez da disolbatzaile organikorik edo ioi metalikoen kontzentrazio handirik egon behar azido nukleikoen laginetan entzima inhibitu dezaketen.
④ RNA eta beste azido nukleikoen kutsadura ezabatu behar dira DNA erauztean, eta alderantziz.
Argitalpenaren ordua: 2022-12-24
